
Agrisera講座 II:Western Blot精準判讀與典型誤區(qū)規(guī)避
為助力科研人員攻克Western Blot實驗中的常見難題,西美杰攜手Agrisena公司技術(shù)專家Joanna博士,共同推出【W(wǎng)estern Blot全流程優(yōu)化】系列專題...2025-11-11更多>

熱烈慶祝西美杰榮獲科興“聚勢·卓越貢獻獎”
2025年8月28日,由北京科興控股(集團)有限公司(以下簡稱“科興集團”)主辦的2025供應(yīng)鏈生態(tài)大會在位于北京昌平的科興來福城舉辦,這也是...2025-09-01更多>

Cygnus講座邀請/宿主細胞蛋白(HCP)分析進展與質(zhì)量風(fēng)險控制策略
講座時間:北京時間2025年9月4號(周四)23:00報名方式:https://globalmeet.webcasts.com/starthere.jsp?ei=1730233&tp_key=11ee2072ce&...2025-09-01更多>

熱烈慶祝西美杰榮獲LGC亞太區(qū)優(yōu)秀合作伙伴獎項
在2025年的亞太地區(qū)渠道合作伙伴會議上,北京西美杰科技科學(xué)有限公司(以下簡稱“西美杰”)榮獲了兩項由LGC頒發(fā)的重量級獎項,分別是亞太區(qū)...2025-08-28更多>

Cygnus AccuRes? HCD檢測試劑盒特價促銷
在生物制品的生產(chǎn)過程中,宿主細胞DNA可能會殘留其中,這將會導(dǎo)致致癌基因或其他風(fēng)險的遺傳物質(zhì)進入到最終的藥物制劑中。為了降低這種風(fēng)險,...2025-03-20更多>

PhytoTech植物組培產(chǎn)品促銷活動
限時瘋搶!PhytoTech 植物組培產(chǎn)品促銷盛宴來襲,全場低至2折起,涵蓋各類凝膠、激素、抗生素等。實惠的價格,優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品,西美杰常備現(xiàn)貨,...2025-02-12更多>

Applichem 核酸污染清除試劑(A7089)特價促銷
2024-12-12更多>

Applichem 分子生物學(xué)級去離子甲酰(A2156) 特價促銷
2024-12-12更多>
HCP ELISA方法學(xué)驗證——精密度與重復(fù)性(Precision & Reproducibility)
當(dāng)我們已經(jīng)驗證過HCP ELISA與樣品基質(zhì)的兼容性,并且找到了樣品的最低需求稀釋度(MRD)后,那么下一步就是驗證ELISA方法的精密度,進而完成法規(guī)要求的ELISA方法學(xué)驗證的全部流程。 什么是精密度和重復(fù)性? 精密度是指多次檢測結(jié)果之間的一致性程度,通常以實驗的重復(fù)性進行評估,以變異系數(shù)(%CV)來表示。 計算公式:%CV=(標(biāo)準差/平均濃度)×100% 通過此公式,可以評估兩種精密度: 批內(nèi)精密度:衡量單次實驗內(nèi)不同復(fù)孔之間的重復(fù)性。嚴格的批內(nèi)CV表明樣品讀數(shù)不受加樣位置或操作程序的影響。 批間精密度:衡量多次獨立實驗之間的重復(fù)性。確保批間CV在可接受范圍內(nèi)(通常<15-20%,取決于法規(guī)要求)是證明該方法能持續(xù)穩(wěn)定產(chǎn)出可靠結(jié)果的關(guān)鍵指標(biāo)。 法規(guī)要求 ? ICH Q2(R1) 方法:在3個濃度水平下至少進行9次測定,覆蓋該測定的分析范圍(在3個濃度下進行3次重復(fù)) 標(biāo)準:未說明。 ? US FDA 方法:至少在3個濃度水平下進行5次測定,覆蓋該測定的分析范圍(在3個濃度下進行5次重復(fù)) 標(biāo)準:每個濃度水平下精密度的CV%應(yīng)在±20%范圍內(nèi),LLOQ的CV%不應(yīng)超過25%。 ? EMA 方法:在4種濃度下至少進行5次測定(在LLOQ、LLOQ的三倍以內(nèi)、標(biāo)準曲線濃度的30-50%、ULOQ的至少75%,4種濃度下進行5次重復(fù))。 標(biāo)準:每一濃度水平質(zhì)控的批內(nèi)和批間精密度均不應(yīng)超過15%,LLOQ的CV%不應(yīng)超過20%。 常見問題排查:導(dǎo)致CV值偏高的原因 如果實驗結(jié)果的CV值高于試劑盒說明書中的預(yù)期范圍,那么很可能是操作流程或設(shè)備出現(xiàn)了問題,我們建議您按以下步驟進行問題排查與實驗優(yōu)化。 洗板操作 問題原因: 過度劇烈的洗板是CV值異常偏高的常見原因,包括使用自動洗板機、用力拍板等操作,因其可能導(dǎo)致抗原-抗體復(fù)合物發(fā)生非特異性解離,進而造成CV值過高。 優(yōu)化建議: 為實現(xiàn)最佳重復(fù)性,我們強烈推薦洗瓶洗板法,可以通過交替方向加入洗液來確保每個孔的清洗時間保持基本一致。有關(guān)洗板的詳細操作請參考下文。 如何用正確的洗板方法解決ELISA檢測結(jié)果漂移的問題? 酶標(biāo)儀性能 問題原因: 當(dāng)在低吸光度范圍(如OD值<0.1)的檢測值出現(xiàn)較大波動時,可能提示酶標(biāo)儀存在潛在問題。光源、單色器或濾光片的故障可能導(dǎo)致間歇性信號異?;蛟肼暎祟悊栴}通常無法通過常規(guī)校準程序識別,但會對檢測的靈敏度以及定量限(LOQ)和檢測限(LOD)產(chǎn)生顯著影響。該類問題常表現(xiàn)為在空白孔或僅含有非吸附性液體的孔中,孔與孔之間OD值讀數(shù)標(biāo)準偏差達到0.020或更低。 優(yōu)化建議: 對于HRP-TMB顯色的ELISA,推薦使用雙波長讀數(shù)(如檢測波長450nm,參比波長650nm)。通過雙波長讀數(shù)法,可從檢測波長(如450nm)處的信號值中扣除非特異性信號(如650nm處的背景OD值),從而提高檢測結(jié)果的準確性與可靠性。該方法可以最大限度地減少因污漬或塑料缺陷引起的孔間差異,從而提升精密度與準確度。 (注:質(zhì)量良好的板條在參比波長(如650nm)的OD值通常很低(平均約0.040),且孔間OD值標(biāo)準差極?。s0.002)。若實際檢測OD值遠高于0.040且標(biāo)準差大于0.004,則表明酶標(biāo)儀可能存在問題。) 試劑污染 問題原因: Cygnus的ELISA試劑盒靈敏度高達pg/mL至ng/mL級別,實驗室環(huán)境中潛在的高濃度分析物(如培養(yǎng)基、上游工藝樣品中的HCP或BSA,濃度可達mg/mL級),非常容易對試劑盒中的關(guān)鍵組分造成污染,如果檢測結(jié)果出現(xiàn)孔板中個別孔吸光值偏差過大,且同一個試劑盒重復(fù)后偏差數(shù)據(jù)值相似,則可能是孔板的孔、標(biāo)準品或酶標(biāo)抗體出現(xiàn)了污染。 優(yōu)化建議: 盡可能在遠離處理上游樣品的區(qū)域內(nèi)進行ELISA實驗操作,避免交叉使用移液器,做好操作臺面與儀器的清潔,盡可能使用帶有濾芯的吸頭等。 分析人員與儀器 問題原因: 操作不規(guī)范,移液器未校準或使用質(zhì)量不達標(biāo)的吸頭,均可能對檢測結(jié)果的精密度產(chǎn)生不利影響。 優(yōu)化建議: 邀請另一位分析人員在獨立實驗室中使用不同設(shè)備進行平行測試,可能有助于您確定精密度不理想的原因是由于操作人員缺乏經(jīng)驗,還是常規(guī)實驗室工具存在問題,比如移液器未校準或吸頭質(zhì)量差。 成功完成ELISA方法的精密度與重復(fù)性驗證,是確保數(shù)據(jù)可靠、推動項目前進的基石。Cygnus針對每一種檢測試劑盒均提供相應(yīng)的QS(Qualification Summary)文件,如有需求歡迎點擊這里填寫信息索取,或直接聯(lián)系Cygnus中國總代理西美杰。如您在使用Cygnus HCP ELISA試劑盒的過程中遇到任何問題,我們的技術(shù)支持團隊將竭誠為您提供解決方案和建議。 Cygnus Technologies專注為生物技術(shù)和生物制藥行業(yè)提供產(chǎn)品和分析方法超過25年,旨在加速研發(fā)階段和提高產(chǎn)品質(zhì)量。Cygnus開發(fā)和生產(chǎn)的生物工藝殘留試劑盒,用于檢測超過50種不同表達系統(tǒng)的特異性雜質(zhì)。Cygnus作為專注于生物技術(shù)應(yīng)用免疫檢測的高靈敏度分析技術(shù)的專家,其產(chǎn)品和服務(wù)已經(jīng)被全球超過95%以上生物制藥公司使用,并獲得FDA、NMPA、EMA等監(jiān)管機構(gòu)的廣泛認可。 北京西美杰科技有限公司作為Cygnus在中國總代理,與國內(nèi)眾多知名藥企,CRO/CMO企業(yè)建立了長久穩(wěn)定的合作關(guān)系。多年來西美杰的產(chǎn)品及服務(wù)幫助許多企業(yè)加速R&D階段,提高藥物質(zhì)量、純度和安全,加速優(yōu)化研發(fā)工藝,減少產(chǎn)品上市時間,降低QC成本。如您對上述產(chǎn)品感興趣,歡迎致電西美杰客服熱線400-050-4006或者登陸網(wǎng)站www.aoxiangbz.com了解更多信息。 更多>基于新型納米纖維的LentiHERO在LVV和HSV純化工藝中的應(yīng)用
溶瘤病毒如單純皰疹病毒(HSV)和痘苗病毒因能在腫瘤細胞中選擇性復(fù)制,誘導(dǎo)腫瘤細胞溶解和觸發(fā)免疫應(yīng)答的能力,而在癌癥治療領(lǐng)域中逐漸受到重視。同樣,慢病毒載體(LVV),如伽利略病毒(GalV)和VSV-G能夠通過實現(xiàn)細胞類型特異性轉(zhuǎn)導(dǎo)來增強基因治療效果。這些病毒對下游的純化策略產(chǎn)生了顛覆性影響。 常用于基因治療的病毒載體尺寸示意圖:腺相關(guān)病毒AAV、慢病毒LVV、單純皰疹病毒HSV和痘苗病毒VACV 對于這些尺寸較大的病毒載體,傳統(tǒng)的基于瓊脂糖的層析方法在工藝放大、產(chǎn)量提升以及雜質(zhì)(如HCP等)去除等方面存在局限性。為了解決這些瓶頸問題,Astrea Bioseparations研發(fā)推出的新一代基于納米纖維的層析介質(zhì)LentiHERO為病毒純化提供了新的思路。相比于傳統(tǒng)的瓊脂糖基質(zhì),LentiHERO不論從結(jié)合載量、雜質(zhì)去除還是工藝放大等方面都具有顯著優(yōu)勢。以下研究將從病毒的結(jié)合能力、回收率、HCP和dsDNA的去除能力、工藝放大等方面充分評估LentiHERO對不同包膜(VSV-G、4070A、GalV)的LVV假病毒和溶瘤病毒HSV的純化性能。1. LVV生產(chǎn)和純化工藝流程 LentiHERO對VSV-G LVV有更高的結(jié)合力與動態(tài)結(jié)合載量 下圖是VSV-G LVV樣品在不同流速下通過LentiHERO(LH)與Q膜流穿液的TU和p24檢測結(jié)果,LentiHERO對LVV的結(jié)合能力顯著高于Q膜。由此表明,LeniHERO在LVV流穿之前能夠處理更大體積的料液。 LentiHERO有更高的動態(tài)結(jié)合載量 提升LVV回收率與純度的優(yōu)化方案 如下圖所示,條件優(yōu)化后LVV回收率提升至82%,收獲的病毒滴度>2E+9 TU/mL,且HCD/HCP去除率>90%。 LentiHERO®可大幅減少純化的緩沖液體積 生產(chǎn)規(guī)模所需的緩沖液體積預(yù)估 精氨酸洗脫可以省去洗脫后的稀釋步驟,簡化工藝流程; 低鹽或精氨酸洗脫可顯著減少緩沖液用量并降低處理體積。 使用LentiHERO® 1純化非VSV-G包膜的LVV假病毒 重組慢病毒可以通過不同的包膜蛋白來提高轉(zhuǎn)導(dǎo)效率和改變特異性,從而直接影響下游純化策略。 不同類型慢病毒在細胞和基因治療中的應(yīng)用 LentiHERO® 1對LVV的回收率(TU) LentiHERO®成功實現(xiàn)了非VSV-G慢病毒(4047A:100%,GalV:36%)的高效純化。 LentiHERO®具備強大的雜質(zhì)去除能力,在不影響載體功能的情況下可去除>98%的HCP及>87%的dsDNA殘留 2. HSV-1溶瘤病毒生產(chǎn)和純化工藝流程 LentiHERO®純化野生型HSV-1(KOS)的結(jié)果 篩選裝置上樣量15ml,測得填料載量為1.5E+10 IU/ml。 感染性HSV回收率為56%,LentiHERO®載量可達9.2E+9 IU/ml,大部分感染性HSV在0.6M NaCl條件下被洗脫。 LentiHERO®純化pBACYAC-HSV-1(KOS)的結(jié)果 篩選裝置上樣量20ml,測得填料載量為3E+8 IU/ml。 用0.8M精氨酸洗脫,HSV回收率可達到69%,LentiHERO®載量可達1.4E+8 IU/ml,同時實現(xiàn)高效的雜質(zhì)去除。 結(jié)論 ? LentiHERO®弱陰離子納米纖維層析技術(shù)可廣泛應(yīng)用于多種病毒載體的純化,包括不同包膜的慢病毒(4070A,VSV-G,GalV),溶瘤病毒HSV-1; ? LentiHERO®純化病毒具有高回收率:4070A: 100%,VSV-G: 82%,GalV: 36%,HSV-1: 69% ? LentiHERO®具有高效的宿主蛋白去除效率:HCP去除率>97% ? LentiHERO®可放大形成平臺工藝,適用于工業(yè)化生產(chǎn) ? LentiHERO®具備拓展應(yīng)用于其他病毒載體的潛力,如腺病毒,痘苗病毒及病毒樣顆粒(VLPs)等 ? LentiHERO®支持基因治療及溶瘤病毒生產(chǎn)工藝的優(yōu)化 產(chǎn)品信息 貨號 品名 規(guī)格 NL100100 Nereus LentiHERO 2 unit pack(離心管形式) LH0001001A LentiHERO® 1 1 mL(層析柱形式) LH0010001B LentiHERO® 10 10 mL(層析柱形式) LH0010001C LentiHERO® 100 100 mL(層析柱形式) 如您對上述產(chǎn)品感興趣,歡迎點擊這里填寫信息,Astrea Bioseparations技術(shù)專家將為您提供個性化優(yōu)化方案,切實幫您解決純化工藝中的疑難問題。 Astrea Bioseparations于1987年孵化自劍橋大學(xué),擁有超過30年層析介質(zhì)研發(fā)和生產(chǎn)經(jīng)驗,是世界級層析介質(zhì)產(chǎn)品與服務(wù)供應(yīng)商。目前使用Astrea的產(chǎn)品已有超過21個生產(chǎn)工藝通過了FDA和EMA的批準。Astrea Bioseparations在全球擁有3個研發(fā)和生產(chǎn)基地,專注為生物大分子和CGT領(lǐng)域提供行業(yè)領(lǐng)先的層析介質(zhì)和技術(shù)服務(wù)。Astrea Bioseparations推出的基于納米纖維的新型層析技術(shù),解決了傳統(tǒng)生物分離工具載量低和工藝耗時問題,實現(xiàn)更快、更環(huán)保、更具成本效益的純化過程,完全符合當(dāng)今生物治療創(chuàng)新的需求。 西美杰是Astrea Bioseparations中國區(qū)代理,為用戶提供完善的技術(shù)支持與售后服務(wù)。歡迎隨時撥打西美杰客服熱線400-050-4006或登錄網(wǎng)站www.aoxiangbz.com了解更多信息。 更多>
京公網(wǎng)安備 11010802028692號 北京西美杰科技有限公司